课程简介
生命是世界上最复杂的物质存在，基因工程的研究已进入定向改造生物性状的时代，在解决粮食、资源、环境、能源的压力，以及营养、医药、健康等方面展示出前所未有的前景。
课程以探究性实验绿色荧光蛋白GFP基因的克隆、重组、筛选、表达以及蛋白纯化为主线，划分为仪器使用、核酸制备、核酸纯化与检测、基因重组、基因表达与蛋白分析等六个章节，包含20多个连续的系列实验。鼓励大家参与实验的设计，熟悉科研的手段，感受科研的魅力。并要求学员加强实践、勤于思考、勇于探索，提升发现问题、分析问题与解决问题的能力。
课程的第1章为3学时，其余5章每章为9学时。
课程大纲
导论
1.1课程概述
1.2器具使用(1)
1.3器具使用(2)
1.4实验框架
核酸制备
2.1基因组DNA提取
2.2 PCR扩增靶基因
2.3 RNA提取
2.4 反转录合成cDNA
2.5质粒DNA提取(1)
2.6质粒DNA提取(2)
核酸纯化与检测
3.1 DNA检测
3.2 RNA变性电泳
3.3 DNA纯化(1)
3.4 DNA纯化(2)
3.5 DNA切胶分离
3.6 实时荧光定量PCR
基因重组
4.1 DNA酶切
4.2 DNA连接
4.3导入大肠杆菌(1)
4.4导入大肠杆菌(2)
4.5阳性克隆常规筛选(1)
4.6阳性克隆常规筛选(2)
基因表达
5.1 GFP克隆筛选
5.2诱导表达
5.3细胞破碎
5.4蛋白亲和纯化(1)
5.5蛋白亲和纯化(2)
蛋白分析
6.1 蛋白定量(1)
6.2 蛋白定量(2)
6.3 SDS-PAGE分析(1)
6.4 SDS-PAGE分析(2)
6.5 SDS-PAGE分析(3)
6.6 Western杂交(1)
6.7 Western杂交(2)
1.1课程概述
1.2器具使用(1)
1.3器具使用(2)
1.4实验框架
核酸制备
2.1基因组DNA提取
2.2 PCR扩增靶基因
2.3 RNA提取
2.4 反转录合成cDNA
2.5质粒DNA提取(1)
2.6质粒DNA提取(2)
核酸纯化与检测
3.1 DNA检测
3.2 RNA变性电泳
3.3 DNA纯化(1)
3.4 DNA纯化(2)
3.5 DNA切胶分离
3.6 实时荧光定量PCR
基因重组
4.1 DNA酶切
4.2 DNA连接
4.3导入大肠杆菌(1)
4.4导入大肠杆菌(2)
4.5阳性克隆常规筛选(1)
4.6阳性克隆常规筛选(2)
基因表达
5.1 GFP克隆筛选
5.2诱导表达
5.3细胞破碎
5.4蛋白亲和纯化(1)
5.5蛋白亲和纯化(2)
蛋白分析
6.1 蛋白定量(1)
6.2 蛋白定量(2)
6.3 SDS-PAGE分析(1)
6.4 SDS-PAGE分析(2)
6.5 SDS-PAGE分析(3)
6.6 Western杂交(1)
6.7 Western杂交(2)
